共聚焦显微镜（LSM 800）

（1）基本作用原理 激光扫描共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope）是在传统光学显微镜基础上，激光扫描共聚焦显微镜用激光作为光源，采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对所观察的对象进行数字图像处理观察、分析和输出。 其特点是可以对样品进行断层扫描和成像，进行无损伤观察和分析细胞的三维空间结构。 同时，利用免疫荧光标记和离子荧光标记探针，该技术不仅可观察固定的细胞、组织切片,还可以对活细胞的结构、分子、离子及生命活动进行实时动态观察和检测，在亚细胞水平上观察诸如 Ca2+，pH 值，膜电位等生理信号及细胞形态的变化，成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域中新一代强有力的研究工具，极大地丰富了人们对细胞生命现象的认识。 （2）主要规格及技术指标 主机：电动型正置荧光显微镜（Imager Z1）； 物镜倍数：10×、20×、40× 油镜、63× 油镜； 激光器：405nm、488nm、561nm、640nm；           

（1）样本需使用共聚焦相应耗材加载，盖玻片及各类器皿皿底厚度标准为0.17mm。 （2）荧光染料选用原则：需选择与此设备激发波长相匹配的染料；多种染料同时选用，需注意接收波长的范围，2个相近的染料接收波长之间至少要有20-30nm的间隔。荧光染料选择指南可参考：https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/cell-analysis/fluorophores.html （3）样本建议加抗淬灭剂；抗淬灭剂的使用可参考以下网站：https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/cell-analysis/cellular-imaging/fluorescence-microscopy-and-immunofluorescence-if/mounting-medium-antifades.html （4）封片剂：如需使用油镜，建议使用固化封片剂；如使用液封和密封剂（熔解石蜡或指甲油）封片，务必要注意某些密封剂自身会发出荧光，同时还要避免对任何靠近密封剂的区域成像。可参考：https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/cell-analysis/cell-analysis-learning-center/molecular-probes-school-of-fluorescence/imaging-basics/labeling-your-samples/mounting-media.html#what

（1）培训须知 ①　培训方式：“一对一”带样品上机操作培训，不定期举办相关的技术应用讲座或小班上机操作培训； ②　仪器预约成功后，需提前联系仪器负责人预约培训，并说明样品情况，包括样品种类、染色方案等； ③　非工作时间段仅对熟悉该仪器的用户开放预约使用，新用户烦请预约工作时间段； （2）日常维护与故障排除 ①　预约最早时间段的用户需要严格按照操作规程开机；预约最晚时间段的用户使用完仪器后，需严格按操作规程完成关机；中间的用户只需要关闭软件下机，避免多次开关激光，造成激光损耗。 ②　油镜使用完毕后需要用擦镜纸和无水乙醇清洁物镜（附件3）。 ③　镜下观察可以看到样本，但屏幕软件无法看到：首先，确认光路切换拉杆是否已拉出，切换到电脑；其次，确认参数是否设置在一个可视范围，设置方法可参考附件1；最后，调整显微镜细调至最大焦平面。 ④　镜下无法观察到样本：首先，检查荧光灯是否已经打开；其次，检查荧光挡板是否在正确位置。 （3）数据拷贝 ①　仪器保存的数据为CZI格式，为了维护电脑系统安全，需用光盘拷贝数据，严禁使用U盘； ②　可使用电脑刻录软件，或将文件复制粘贴至光盘，打开光盘，点击工具栏上的“刻录到光盘”进行刻录。 可提前5天预约，每位用户每天可预约时长为2小时。